Co-coltura di cellule di Schwann con neuroni DRG su una membrana pre-stirata
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:44 min. • July 8th, 2025
Prendi una camera di silicio attaccata a una membrana di silicio tesa rivestita di matrice.
Aggiungere i gangli della radice dorsale o la sospensione cellulare DRG e incubare.
La matrice favorisce l'attacco e la moltiplicazione cellulare, mentre la superficie allungata guida l'allineamento degli assoni.
Aggiungere inibitori della crescita che eliminano le cellule gliali che si dividono attivamente, consentendo ai neuroni che non si dividono di sopravvivere.
Rimuovere il mezzo. Aggiungere un terreno di coltura e incubare.
Il neurone rileva un aumento della rigidità della membrana nella direzione allungata e orienta di conseguenza la crescita dell'assone.
Aggiungere le cellule di Schwann coltivate e raccolte alla coltura DRG e incubare.
Le cellule di Schwann si attaccano all'assone rigenerato, isolando il neurone.
Ciò migliora la sopravvivenza e la funzionalità dei neuroni, stabilendo una co-cultura.
Prima di seminare i neuroni DRG, rimuovere la soluzione PLL dalla camera. Sciacquare la superficie del PDMS con acqua sterile e asciugarla all'aria. Dopo aver risospeso le cellule, lasciare riposare la sospensione per 1 o 2 minuti per consentire ai detriti di depositarsi sul fondo del tu
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