Generazione di cellule endoteliali cerebrali da cellule staminali pluripotenti indotte

Prelevare una coltura di cellule staminali pluripotenti indotte, o iPSC, in terreni di mantenimento contenenti inibitori della Rho-chinasi.

I fattori di crescita mantengono le cellule indifferenziate, mentre gli inibitori della Rho-chinasi migliorano la sopravvivenza cellulare.

Sostituire il terreno con un nuovo terreno di manutenzione, rimuovendo gli inibitori della rho-chinasi. Incubare, promuovendo la formazione di colonie.

Sostituire regolarmente con terreni non condizionati, che forniscono un ambiente controllato, innescando la differenziazione delle iPSC in progenitori neurali e quindi in cellule endoteliali cerebrali, seguita dalla proliferazione cellulare.

Sostituire con terreni cellulari endoteliali contenenti acido retinoico e fattori di crescita dei fibroblasti. Incubare.

I fattori di crescita dei fibroblasti facilitano la proliferazione cellulare, mentre l'acido retinoico promuove la maturazione delle cellule endoteliali cerebrali.

Aggiungere enzimi proteolitici per staccare le cellule. Raccogliere le celle e centrifugare. Scartare il surnatante.

Risospendere le cellule in mezzi endoteliali e seminarle su un inserto di membrana multipozzetto rivestito di collagene e fib