Isolamento delle cellule gliali enteriche dalla sottomucosa e dalla lamina propria di un topo

Prendiamo un segmento di intestino tenue di topo precedentemente spogliato del muscolo longitudinale e del plesso mioenterico, degli strati contenenti neuroni enterici e delle cellule gliali.

Tagliare il fazzoletto e metterlo in un tampone contenente EDTA. Incubare con dondolo.

L'EDTA interrompe le giunzioni cellula-cellula, staccando la mucosa epiteliale dalla sottostante lamina propria e dalla sottomucosa, gli strati di tessuto connettivo contenenti cellule gliali enteriche.

Pipettare ripetutamente per rimuovere le cellule epiteliali.

Filtrare attraverso un filtro a celle ed eliminare il flusso.

Trasferire il tessuto in un tampone di dissociazione non enzimatico e incubarlo con l'oscillazione. Il tampone di dissociazione allenta la lamina propria e la matrice extracellulare sottomucosa, staccando le cellule.

Pipettare ripetutamente per dissociare ulteriormente le cellule.

Filtrare attraverso un colino cellulare per raccogliere le cellule.

Centrifugare e risospendere le cellule in un tampone.

Prelevare pozzetti rivestiti di proteine di adesione contenenti un terreno di crescita gliale e placcare le cellule.

Il rivestimento facilita l'adesione cellulare, mentre i fattori di crescit