Purificazione dei capillari da un cervello suino

Prendete un cervello suino.

Rimuovere le meningi, la membrana protettiva che copre il cervello, per prevenire la contaminazione delle cellule meningee.

Raschiare la materia grigia, una regione ricca di capillari, e raccogliere il tessuto in una piastra di coltura contenente terreni.

Passare la sostanza grigia attraverso una siringa senza ago per frammentare il tessuto.

Trasferire i frammenti in un omogeneizzatore e omogeneizzare per disintegrare ulteriormente il tessuto, rilasciando i capillari cerebrali.

Far passare l'omogenato attraverso un filtro con una dimensione specifica dei pori per trattenere i capillari, consentendo ad altre cellule cerebrali di fluire.

Porre il filtro in una soluzione contenente enzimi e DNasi.

Gli enzimi staccano le cellule aderenti, mentre la DNasi degrada il DNA contaminante, facilitando l'isolamento dei capillari puri.

Lavare i capillari dal filtro.

Aggiungere terreni contenenti proteine del siero per inattivare gli enzimi.

Trasferire i capillari in una provetta, centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendere i capillari puri in un terreno fresco per ulteriori analisi.

Per iniziare questa procedura, posizionare i cervelli in un banco di flusso