Preparazione di fette collicolo-talamocorticali da un cervello di cucciolo di topo

Posiziona il cervello di un cucciolo di topo su uno scivolo con il lato dorsale rivolto verso l'alto.

Taglia la parte anteriore del cervello e riposizionalo sulla superficie piana creata.

Allineare la superficie dorsale e la linea mediana del cervello sul vetrino. Tagliare ad angolo per allineare le strutture uditive del mesencefalo e del proencefalo collegate. Queste strutture sono il collicolo inferiore o IC, il corpo genicolato mediale o MGB, il nucleo reticolare talamico o TRN e la corteccia uditiva o AC.

Fissare la superficie cerebrale tagliata angolarmente su un palco per campioni di vibratomo con blocchi di agar, assicurandosi che il rombencefalo sia appoggiato sul blocco più sottile.

Trasferire il tavolino nel vibratomo e aggiungere un tampone per evitare danni ai tessuti.

Inizia lo slicing per individuare IC, MGB, TRN e AC.

Recuperare la fetta contenente le regioni collegate, chiamata fetta collicolo-talamocorticale, e trasferire la fetta in una camera di contenimento per preservare la vitalità del tessuto.

Per preparare la fase di taglio per l'affettatura, tagliare un pezzettino di agar al 3% di circa 1 centimetro cubo da utilizzare come antipasto per il cervello, e un altro pezzo di 1,5 centimetri per 1,5 millimetri per 3 millimetri da utilizzare come protuberanza per sostenere il collicolo inferiore.

Quindi, incolla il backstop sul palco con adesivo cianoacrilato, quindi incolla la protuberanza sul lato destro del backstop in modo che formino un angolo di 80 gradi. Su un vetrino contrassegnato da due linee a 90 gradi e una linea diagonale a 17 gradi dall'alto a sinistra al basso a destra, posizionare il lato dorsale del cervello verso l'alto nel punto di intersezione delle due linee.

Usando una lama di rasoio, rimuovi da 2 a 4 millimetri dell'estremità rostrale del cervello per creare una superficie piana. Quindi, posiziona il cervello con il lato caudale rivolto verso l'alto sulla superficie piana appena creata. Allineare la superficie dorsale del cervello con una linea orizzontale e la linea mediana del cervello con una linea verticale segnata sul vetrino. Quindi, allineare la lama del rasoio con una linea di 17 gradi. Inclina il rasoio con un angolo di 30 gradi e rimuovi circa 3 millimetri della corteccia destra con un doppio taglio diagonale.

Per montare il cervello sul palco del vibratomo, posizionare un piccolo pezzo di carta da filtro sul lato ventrale del cervello in modo che la dimensione lunga sia perpendicolare alla linea mediana. Applicare con cura una piccola quantità di adesivo cianoacrilato sull'area davanti al dispositivo antiritorno e a sinistra del dosso. Successivamente, posizionare il lato del cervello tagliato in diagonale sulla colla in modo che la parte caudale del cervello e il romboencefalo siano appoggiati sulla protuberanza e il lato destro del cervello sia contro il backstop.

In questa procedura, posizionare rapidamente la fase di taglio nel vibratomo. Riempi il palco con la soluzione di taglio. Quindi, allinea la lama con la parte superiore del cervello. Rimuovere da 1 a 1,5 millimetri dalla parte superiore del cervello. Quindi, affettare e rimuovere altre fette da 300 a 500 micrometri mentre ci si sposta più in profondità.

Quando il collicolo inferiore, il corpo genicolato mediale e il nucleo genicolato laterale sono tutti visibili, il giro dentato dovrebbe apparire a forma di C e la struttura dovrebbe essere allineata. Ricavare circa due fette da 600 micrometri. Queste sono le fette collicolotalamocorticali. Successivamente, trasferiscili nella camera di contenimento a 32 gradi Celsius.