Isolamento e coltura di periciti cerebrali di topo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:43 min. • July 8th, 2025
Aggiungi un tampone al tessuto cerebrale del topo e omogeneizzalo per rilasciare cellule e microvasi.
Quindi, aggiungere la soluzione di BSA-destrano all'omogeneizzato. Mescolare e centrifugare per separare i componenti. Scartare il surnatante.
Risospendere i microvasi nel tampone e farli passare attraverso un filtro, rimuovendo i vasi più grandi.
A questo punto, centrifugare il filtrato e rimuovere il surnatante. Risospendere i microvasi in tampone contenente DNAses.
Aggiungere enzimi proteolitici per rilasciare cellule endoteliali e periciti.
Le DNasi degradano il DNA.
Aggiungere un tampone contenente BSA per interrompere l'attività enzimatica. Centrifugare ed eliminare il surnatante.
Risospendere le cellule in un terreno e piastrle su una piastra multipozzetto rivestita in matrice basamentale. Incubare, favorendo l'adesione cellulare.
Cambia regolarmente i media.
Le cellule endoteliali formano un monostrato e supportano la crescita dei periciti.
Il successivo passaggio delle cellule nei terreni pericitari su una piastra multipozzetto rivestita di gelatina promuove la crescita dei periciti eliminando le cellule endoteliali.
Inizia posizionando il cervello di un topo maschio C57 b
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici