Ottenimento di una sospensione unicellulare dal tessuto ippocampale di topo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:42 min. • July 8th, 2025
Prelevare frammenti di ippocampo di topo adulto perfusi in una provetta di dissociazione contenente papaina e DNasi.
Posizionare il tubo su un dissociatore meccanico.
Il dissociatore disintegra meccanicamente il tessuto, allentando le cellule, compresi i neuroni e le cellule gliali.
La papaina rompe la matrice extracellulare del tessuto, rilasciando le cellule. La DNasi degrada il DNA contaminante.
Aggiungere un tampone contenente BSA, inattivando gli enzimi.
Passare la sospensione attraverso un colino per rimuovere i detriti di grandi dimensioni.
Centrifugare il filtrato. Scartare il surnatante ricco di enzimi.
Risospendere le cellule nel tampone e trasferirle in una nuova provetta.
Aggiungere il gradiente di densità, mescolare e sovrapporre la miscela con il tampone.
Durante la centrifugazione, le cellule e i detriti formano strati separati in base alla loro densità.
Rimuovere lo strato tampone più in alto e lo strato centrale di detriti
.Aggiungere il buffer allo strato inferiore contenente le celle e mescolare. Centrifugare ed eliminare il surnatante contenente il mezzo di gradiente di densità.
Risospendere le cellule dell'ippocampo in tampone per ulteriori analisi.
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