Preparazione di una sospensione unicellulare di cellule immunitarie da tessuto cerebrale murino

Inizia con un cervello murino con cellule neurali, non neurali e immunitarie all'interno della matrice extracellulare del cervello o ECM.

Tritare il tessuto e risospenderlo in un terreno di coltura.

Trasferire questi frammenti di tessuto in una provetta e trattarli con collagenasi ed enzimi DNasi-I.

La collagenasi digerisce la MEC, rilasciando singole cellule, mentre la DNasi-I degrada il DNA libero per prevenire l'aggregazione cellulare.

Quindi, aggiungere EDTA per inattivare gli enzimi collagenasi.

Aggiungere un terreno di coltura. Centrifugare e rimuovere il surnatante.

Aggiungere una soluzione di gradiente di densità e il terreno di coltura al pellet cellulare, creando uno strato di gradiente a bassa densità.

Mescolare e quindi stendere la soluzione con una soluzione a gradiente ad alta densità per stabilire una differenza di densità.

Centrifugare a bassa velocità per separare le cellule immunitarie all'interfaccia, con detriti cellulari più leggeri nella parte superiore e cellule neuronali e gliali più pesanti nella parte inferiore.

Rimuovere lo strato superiore, raccogliere le cellule immunitarie e trasferirle in un'altra provetta.

Centrifugare e rimuovere il surnatante, quin