Analisi della riattivazione delle cellule staminali neurali negli espianti cerebrali di Drosophila in coltura

In risposta a stimoli esterni, le cellule staminali neurali cerebrali della Drosophila, o NSC, escono dalla quiescenza, uno stato di arresto del ciclo cellulare, e si riattivano per iniziare la proliferazione.

Prendiamo le larve di Drosophila appena schiuse, uno stadio in cui le NSC escono naturalmente dalla quiescenza in vivo.

Afferra i ganci della bocca e il corpo per dividere la larva.

Individua il cervello dietro i ganci della bocca e asportalo.

Trasferire i cervelli in pozzetti per piastre di coltura contenenti terreni.

Nei pozzetti trattati, il terreno contiene un ormone di prova, mentre i pozzetti di controllo mancano dell'ormone. Incubare.

In condizioni di controllo, le NSC rimangono quiescenti a causa dell'assenza di stimoli esterni.

Nei pozzetti trattati, l'ormone si lega a specifici recettori NSC, attivando le vie di segnalazione a valle e riattivando le NSC.

Le NSC riattivate entrano nel ciclo cellulare e vanno incontro a proliferazione.

Dopo l'incubazione, i cervelli sono ora pronti per l'analisi a valle per visualizzare la proliferazione delle NSC, confermando il potenziale di riattivazione dell'ormone.

Sezionare il cervello dalle larve poste nel secondo piatto di vetro con SSM, usando una pinza al microscopio da dissezione e regolando l'ingrandimento secondo necessità. Usa una pinza per afferrare i ganci della bocca e con l'altra, afferra delicatamente il corpo a metà e tira nella direzione opposta per dividere la larva in due pezzi. Dopo aver sezionato da 15 a 20 cervelli, aggiungere 1 millilitro di SSM in un pozzetto di un vassoio di coltura sterile da 24 pozzetti. Utilizzando una micropipetta e una punta sterile, trasferire i cervelli appena sezionati nell'SSM, quindi incubare il terreno con cervelli per 24 ore a 25 gradi Celsius.