Isolamento delle cellule di Schwann dalle radici spinali del topo

Prendete una radice nervosa e tagliatela a pezzetti.

Trasferire in una provetta contenente enzimi digestivi e incubare.

L'enzima digerisce la matrice extracellulare.

Aggiungere terreni contenenti siero per fermare la digestione.

Pipettare ripetutamente il contenuto, quindi centrifugare ed eliminare il surnatante.

Risospendere il pellet.

Passare la sospensione attraverso un colino per rimuovere il tessuto non digerito. Incubare le cellule raccolte in una piastra.

I fibroblasti e le cellule di Schwann o SC si attaccano alla piastra e si dividono.

Rimuovere le celle non collegate. Lavare le cellule attaccate con un tampone fosfato.

Aggiungi enzimi digestivi per sciogliere le SC sensibili alla digestione. Arresta la digestione con i media.

Scollega completamente gli SC aggiungendo file multimediali.

Trasferire le cellule in una provetta e centrifugare. Scartare il surnatante e risospendere le cellule in terreni specifici per SC.

Trasferire le cellule in una piastra non rivestita e incubare.

Eventuali fibroblasti rimanenti aderiranno, lasciando le SC in sospensione.

Trasferire la sospensione su una piastra rivestita di matrice.

Incubare per l'attacco e la divisione delle cellule di Schw