Marcatura dei marcatori di superficie delle cellule neurali con Azidosugar durante la co-coltura con le cellule endoteliali

Iniziare aggiungendo una sospensione di cellule endoteliali cerebrali di topo all'inserto della membrana permeabile di una piastra transwell.

Aggiungere un terreno di coltura sul fondo e incubare.

I fattori di crescita e le sostanze nutritive nel terreno aiutano le cellule a crescere come un monostrato.

Rimuovere il fluido dal pozzetto inferiore e dall'inserto.

Lavare le superfici interne ed esterne dell'inserto per rimuovere eventuali detriti.

Aggiungere un terreno aderente all'inserto e trasferire l'inserto in un pozzetto rivestito di matrice contenente cellule staminali neurali corticali primarie e cellule progenitrici, o NSPC, e incubare.

Aggiungere azidosugar, un analogo innaturale del precursore dell'acido sialico, sia alle cellule endoteliali che alle NSPC, e incubare.

Le citochine e le chemochine secrete dalle cellule endoteliali promuovono la crescita delle NSPC in grandi cloni simili a fogli.

Gli azidozuccheri si integrano nelle strutture sialoglycan sulla superficie cellulare NSPC, marcando la glicoproteina. Ciò consente l'identificazione delle proteine della superficie cellulare sulle NSPC espanse.

Per preparare le cellule endoteliali, risospendere un pellet di cellule