Preparazione dei tubi endoteliali cerebrali dalle arteriole parenchimali di topo

Fissare il cervello di un topo, con il lato ventrale rivolto verso l'alto, in un piatto rivestito di polimero di silicio contenente tampone.

Sezionare una sezione di tessuto dall'emisfero attorno all'arteria cerebrale media, o MCA, con il segmento di tessuto superiore che si estende oltre il punto di ramificazione dal Circolo di Willis.

Fissare il fazzoletto con l'MCA rivolto verso l'alto.

Togliete la pia madre, con le arteriole, che si diramano dall'MCA.

Fissare la pia madre con le arteriole. Sezionare l'arteriola e rimuovere il tessuto circostante. Scartare tutti i rami distali.

Incubare l'arteriola in un cocktail di enzimi proteolitici per facilitare la digestione parziale del segmento.

Sostituire gli enzimi con il tampone e trasferire il segmento digerito in una camera contenente tampone su un tavolino da microscopio dotato di una pipetta per triturazione.

Pipettare ripetutamente l'arteriola per rimuovere l'avventizia allentata e le cellule muscolari lisce, ottenendo un tubo intatto contenente cellule endoteliali arteriolari.

Posizionare il lato ventrale del cervello rivolto verso l'alto in una camera contenente una soluzione di dissezione fredda per isolare le arteriole parenc