Differenziazione delle cellule staminali embrionali di topo in una popolazione di neuroni in rete
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 6:04 min. • July 8th, 2025
Seminare cellule staminali embrionali di topo in un piatto a basso attaccamento contenente mezzi di differenziazione.
Incubare a rotazione per facilitare l'aggregazione cellulare e la differenziazione in una linea neuronale.
Trasferire gli aggregati in un tubo e lasciarli sedimentare per gravità. Eliminare il supporto.
Risospendere e trasferire gli aggregati nel piatto originale contenente mezzi di differenziazione integrati con acido retinoico.
L'acido retinoico induce l'espressione genica neuronale, innescando la differenziazione in cellule progenitrici neurali.
Trasferire gli aggregati in un tubo. Rimuovere il terreno e aggiungere la tripsina per dissociare gli aggregati.
Aggiungere un inibitore per neutralizzare la tripsina.
Pipettare ripetutamente per ottenere una sospensione cellulare omogenea. Filtrare la sospensione per rimuovere gli aggregati.
Centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendere le celle nel terreno.
Semina le cellule su un piatto rivestito di polimero per facilitare l'adesione cellulare.
Rimuovere il supporto. Aggiungere nuovi terreni contenenti fattori di crescita per promuovere la maturazione neuronale e formare una popolazione di neuroni in rete.
La di
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