Generazione di fette di amigdala inclinate da un cervello di topo

Prendete il cervello di un topo immerso in un tampone ghiacciato.

Rimuovere il cervelletto e tagliare la sezione anteriore contenente la corteccia prefrontale mediale, o mPFC.

Attaccare il tessuto a un blocco di agar angolato, che viene incollato su un tavolino per campioni di vibratomo.

Collegare blocchi di agar aggiuntivi per garantire stabilità durante l'affettatura. Posizionare il tavolino all'interno della camera di taglio del vibratomo riempita con tampone ghiacciato ossigenato.

Genera fette inclinate contenenti l'amigdala che rispondono agli stimoli di paura e alle proiezioni neuronali della mPFC, che formano connessioni sinaptiche nell'amigdala e ne regolano l'attività.

Le fette inclinate espongono le proiezioni, consentendo lo studio della connettività funzionale tra la mPFC e l'amigdala.

Tagliate le fette a metà e mettetele in una camera contenente liquido cerebrospinale artificiale ossigenato a temperatura ambiente per stabilizzare il tessuto.

Incubare le fette alla temperatura fisiologica per recuperare il tessuto per i saggi a valle.

Usa un bisturi per tagliare il cervelletto. Quindi, isolare la parte anteriore del cervello contenente la corteccia prefrontale mediale. Riempire la camera di taglio con una soluzione di taglio ghiacciata mantenuta a 4 gradi Celsius utilizzando un'unità di raffreddamento. Ossigenare la soluzione.

Asciugare il cervello con carta da filtro. Incolla il blocco di agar al 4% che è stato tagliato con un angolo di 35 gradi rispetto allo stadio vibratorio e incolla la parte posteriore del tessuto cerebrale su questo blocco. Incolla due blocchi di agar aggiuntivi davanti e dietro il blocco cerebrale per stabilità durante l'affettatura.

Posizionare il tavolino con il tessuto attaccato nella camera di taglio e assicurarsi che sia sommerso. Iniziate a tagliare le fette acute. Tagliare ogni fetta a metà e trasferirla in una camera di interfaccia alimentata con ACSF ossigenato a temperatura ambiente. Dopo aver tagliato le fette acute dell'amigdala, posizionare la camera di interfaccia in un bagno d'acqua a 36 gradi Celsius e lasciare che le fette si riprendano per 35-45 minuti.