Generazione di una fetta di cervello coronale che espone le regioni dell'amigdala da un cervello di topo

Prendi il cervello di un topo in un tampone ghiacciato e rimuovi la sua parte posteriore contenente il cervelletto e la porzione anteriore con la corteccia prefrontale mediale, o mPFC.

La parte centrale contiene regioni dell'amigdala che elaborano emozioni come la paura e l'ansia.

Sposta la sezione del cervello su una carta da filtro per rimuovere il tampone in eccesso.

Incollalo su un tavolino e fissa un blocco di agar dietro la sezione per impedirne il movimento durante l'affettatura.

Posizionare questa fase in una camera di taglio a vibratomo con il tampone ghiacciato.

Tagliare la sezione per ottenere una sottile fetta di cervello coronale.

Questo espone le regioni dell'amigdala, che contengono connessioni sinaptiche tra i neuroni dell'amigdala e le proiezioni dei neuroni mPFC che regolano le risposte dell'amigdala.

Tagliate la fetta in due metà, ciascuna contenente una regione dell'amigdala.

Successivamente, trasferiscili in una camera di interfaccia contenente liquido cerebrospinale artificiale ossigenato.

Recuperare le fette a temperatura fisiologica per mantenere la vitalità neuronale.

Dopo aver ottenuto il cervello, usa un bisturi per rimuovere il cervelletto e la parte interna del cervello, quindi raffredda la parte centrale del cervello in una soluzione di taglio ghiacciata come prima. Tampona il cervello con carta da filtro, quindi incollalo al palco del vibratomo.

Ancora una volta, fissa un blocco di agar aggiuntivo dietro il cervello per stabilità durante l'affettatura. Dopo aver inserito il tavolino nella camera di taglio riempita con una soluzione di taglio a 4 gradi Celsius, tagliare sezioni coronali da 320 micron attraverso l'amigdala. Tagliateli a metà e raccogliete le sezioni nella camera di interfaccia come prima.