Una tecnica per isolare nuclei da cellule non neuronali nel giro dentato dell'ippocampo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:43 min. • July 8th, 2025
Prelevare il giro dentato dal cervello di un topo in un tampone di omogeneizzazione a freddo.
Dissociarsi meccanicamente per rilasciare neuroni, glia e cellule staminali.
Il detergente delicato del tampone permeabilizza le cellule, rilasciando nuclei e altri organelli.
Filtrare l'omogeneizzato per rimuovere i detriti tissutali. Quindi, centrifugare, rimuovere gli organelli e risospendere nel tampone di omogeneizzazione per lisare le cellule intatte.
Centrifugare di nuovo, rimuovere il surnatante contenente gli organelli rilasciati e risospendere i nuclei in un tampone di lavaggio.
Filtrare per rimuovere eventuali detriti, centrifugare e rimuovere il surnatante.
Introdurre una colorazione fluorescente del DNA per marcare tutti i nuclei e un anticorpo coniugato con fluorofori che si lega all'antigene nucleare neuronale, o NeuN, marcando i nuclei dei neuroni.
Utilizzando lo smistamento dei nuclei attivati dalla fluorescenza, è possibile identificare gli aggregati con una maggiore intensità di fluorescenza della colorazione del DNA e proprietà di dispersione più elevate, separando i singoli nuclei.
Analizzare i singoli nuclei, separando i nuclei neuronali NeuN-positivi e isolando i nuc
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