Isolamento della microglia da lesioni demielinizzanti del cervello di topo mediante smistamento cellulare attivato magneticamente

Sezionare le lesioni demielinizzanti colorate dal corpo calloso del cervello di un topo.

Queste lesioni contengono microglia residenti nel cervello che esprimono l'integrina CD11b sulla superficie cellulare.

Raccogliere il tessuto e aggiungere una soluzione contenente un enzima proteolitico e DNasi.

L'enzima degrada la matrice extracellulare, mentre la DNasi degrada il DNA libero.

Aggiungere un tampone freddo e filtrare la sospensione attraverso un colino per rimuovere i grumi cellulari.

Centrifugare, scartare il surnatante e risospendere le cellule pellettate in un mezzo a gradiente di densità.

Sovrapposizione con tampone e centrifuga per raccogliere i detriti rimanenti negli strati superiori; le cellule intatte si depositano sul fondo.

Rimuovere i detriti e risospendere le celle in un tampone.

Aggiungere perline magnetiche anti-CD11b per etichettare la microglia.

Caricare le celle su una colonna contenente sfere ferromagnetiche poste nel campo magnetico del separatore magnetico.

Sotto il campo magnetico esterno, le microglia legate a perle vengono trattenute nella colonna mentre le cellule non legate fluiscono attraverso.

Rimuovere la colonna dal campo magnetico. Aggiungere un ta