Differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo in cellule simili alla microglia

Iniziare con una piastra multipozzetto a bassa aderenza contenente cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo in un corpo embrioide o in un mezzo EB.

Centrifuga per la sedimentazione delle cellule. Incubare per promuovere la proliferazione e l'aggregazione cellulare, formando corpi embrioidi.

I regolatori della linea cellulare promuovono la differenziazione cellulare in progenitori mieloidi.

Raccogli questi EB e trasferiscili sul bordo di una matrice extracellulare o di una piastra rivestita di ECM.

Sostituire il terreno con un precursore primitivo dei macrofagi o un mezzo di differenziazione PMP e agitare delicatamente. Incubare per facilitare l'attaccamento degli EB all'ECM.

Sostituire metà del terreno e incubare.

I fattori di crescita ematopoietici spingono i progenitori mieloidi a differenziarsi in precursori macrofagici primitivi, che si separano dagli EB e compaiono nel mezzo.

Raccogli questi PMP e fai girare le cellule. Risospenderli in un mezzo di differenziazione della microglia.

Seminare queste cellule in una piastra multipozzetto rivestita di laminina e incubarle.

I PMP utilizzano i fattori di differenziazione e i nutrienti, differenziandosi in cellule simili alla