Isolamento di popolazioni cellulari dal tessuto cerebrale mediante smistamento dei nuclei attivati dalla fluorescenza
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:14 min. • July 8th, 2025
Trasferire un pezzo di tessuto cerebrale umano fresco congelato in un macinino adatto contenente tampone di lisi fredda.
Muovi il pestello su e giù per rompere meccanicamente il tessuto, rilasciando le cellule.
Le molecole detergenti nel tampone di lisi rompono la membrana cellulare, liberando i nuclei.
Trasferire il contenuto in una provetta da centrifuga adatta e aggiungere un tampone di saccarosio freddo sul fondo della provetta, creando un gradiente di densità.
Centrifugare ad alta velocità per separare i nuclei sul fondo della provetta.
Scartare il surnatante e risospendere i nuclei in una soluzione salina tamponata.
Aggiungere anticorpi coniugati con fluorofori specifici per il bersaglio ai nuclei e incubare per consentire all'anticorpo di legarsi alla proteina nucleare bersaglio.
Aggiungere un colorante di colorazione nucleare per visualizzare il DNA intatto.
Esegui lo smistamento dei nuclei attivati dalla fluorescenza per ordinare i nuclei di diverse popolazioni cellulari in base a segnali di fluorescenza distinti.
Iniziare a sezionare circa 200-400 milligrammi di tessuto da un campione di tessuto di corteccia adulta umana fresco e congelato. Metti il tessuto in un Douncer
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