Ottenere varie popolazioni di cellule neurali da un ippocampo di ratto
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:00 min. • July 8th, 2025
Prendi frammenti di ippocampo di ratto perfusi.
Incubare con papaina per digerire la matrice extracellulare del tessuto e allentare le cellule, inclusi neuroni, astrociti e microglia.
Aggiungere la DNasi e mescolare.
Dissociare meccanicamente il tessuto utilizzando pipette di diametro progressivamente decrescente per ottenere una sospensione monocellulare. Incubare per la DNasi per degradare il DNA contaminante.
Passare la sospensione attraverso un colino, rimuovendo i detriti.
Aggiungere tampone contenente ioni bivalenti per fermare l'attività enzimatica.
Centrifugare e rimuovere il surnatante ricco di enzimi.
Ora, aggiungi tampone e perline magnetiche anti-mielina. Incubare per le perle per legare i detriti di mielina.
Dopo l'incubazione, centrifugare e rimuovere il surnatante.
Risospendere la miscela in tampone e caricarla su una colonna di separazione magnetica contenente sfere ferromagnetiche poste nel campo magnetico del selezionatore magnetico.
Il campo magnetico trattiene i detriti di mielina legati a biglie magnetiche nella colonna mentre le cellule prive di mielina passano attraverso.
Lavare la colonna con tampone e raccogliere il flusso contenente neuroni, astrociti e mi
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