Isolamento di neuroni da Caenorhabditis elegans tramite smistamento cellulare attivato da fluorescenza

Prelevare una sospensione di cellule ottenute da vermi transgenici Caenorhabditis elegans in un terreno di coltura.

La sospensione contiene cellule di vari tessuti, compresi i neuroni del sistema nervoso.

I vermi transgenici sono stati ingegnerizzati per esprimere una proteina fluorescente coniugata a un trasportatore transmembrana vescicolare. Questo trasportatore, presente sulle vescicole sinaptiche che trasportano il neurotrasmettitore acetilcolina, si trova nei neuroni colinergici di tutto il corpo.

Centrifugare la sospensione cellulare ed eliminare il surnatante. Risospendere le cellule in un terreno di coltura fresco per la selezione cellulare attivata dalla fluorescenza, o FACS.

Analizza la sospensione cellulare utilizzando FACS. I neuroni colinergici marcati in fluorescenza emettono fluorescenza dopo l'esposizione a luce di una lunghezza d'onda appropriata, separandoli da altre cellule non marcate.

Trasferire i neuroni isolati in una piastra a più pozzetti. Incubare le cellule in una camera umidificata per mantenere il livello di umidità.

Centrifugare le celle dalla sospensione cellulare isolata a 10.000 volte g e a 4 gradi Celsius per 5 minuti. Scartare il surnatante e ris