Differenziazione delle cellule progenitrici otiche in cellule epiteliali sensoriali seguita da immunocolorazione
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:55 min. • July 8th, 2025
La coltura ha immortalato le cellule progenitrici otiche multipotenti, o iMOP, in terreni.
I fattori di crescita nel mezzo facilitano la proliferazione delle iMOP e la formazione di colonie, creando otosfere.
Raccogli le otosfere e lasciale depositare per gravità.
Rimuovere i terreni e aggiungere i terreni di differenziazione privi di fattori di crescita. Placcare le otosfere.
L'assenza di fattori di crescita avvia la differenziazione delle iMOP nelle cellule epiteliali sensoriali.
Raccogli le otosfere differenziate e lasciale depositare.
Rimuovere il terreno e aggiungere un fissativo per preservare la morfologia cellulare.
Successivamente, aggiungi un detergente per permeabilizzare le membrane cellulari e nucleari.
Aggiungere un buffer di blocco per impedire il legame di anticorpi non specifici.
Introdurre anticorpi primari mirati a uno specifico marcatore di differenziazione.
Aggiungere anticorpi secondari coniugati con fluorofori che prendono di mira gli anticorpi primari, falloidina marcata in fluorescenza per colorare l'actina e un colorante legante il DNA per colorare i nuclei.
Monta le otosfere.
Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizzare la colorazione per confe
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