Differenziazione di progenitori otici multipotenti immortalizzati in neuroni gangliari a spirale e valutazione della differenziazione

Prelevare una piastra multipozzetto contenente vetrini coprioggetti sterili rivestiti con un substrato di coltura cellulare.

Introdurre progenitori otici multipotenti immortalizzati, o iMOPs, in un mezzo di differenziazione neuronale.

Gli iMOP sono precursori di varie cellule dell'orecchio interno, inclusi i neuroni gangliari a spirale, o SGN, che trasmettono informazioni uditive al cervello.

Incubare, lasciando che le cellule aderiscano al substrato. Il mezzo induce la differenziazione degli iMOP in SGN.

Aggiungere un fissativo per indurre la reticolazione delle proteine, preservando la morfologia cellulare, e una soluzione detergente per permeabilizzare le membrane cellulari.

Introdurre un reagente bloccante per evitare l'etichettatura non specifica.

Aggiungere anticorpi coniugati con fluorofori specifici per i marcatori di differenziazione neuronale e incubare, consentendo agli anticorpi di marcare gli SGN.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati e montare i vetrini coprioggetti con un mezzo di montaggio contenente una colorazione nucleare fluorescente.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, rileva i segnali anticorpali per confermare la differenziazione degli iMOP in