Coltura ex vivo e imaging di fette oculomotorie da embrioni di topo transgenico

Prendi una topolina incinta transgenica, isola chirurgicamente l'utero contenente gli embrioni e lavalo per rimuovere il sangue residuo.

Rimuovere gli embrioni contenenti motoneuroni marcati in modo fluorescente e trasferirli sul coperchio di una piastra a più pozzetti.

Aggiungere l'agarosio fuso e raffreddare il coperchio per indurre la formazione del gel, incorporando gli embrioni.

Al microscopio a fluorescenza, allineare i nuclei oculomotori e gli occhi in linea e tagliare l'agarosio parallelamente alla linea.

Fissare un embrione su un tavolino e posizionarlo in una camera vibratomica riempita con un tampone per affettare a freddo.

Utilizzando il vibratomo, generare fette contenenti i nuclei oculomotori e gli occhi. I nuclei formano i nervi oculomotori che controllano il movimento degli occhi.

Trasferire le fette sugli inserti di coltura all'interno di una piastra a più pozzetti contenente un terreno di coltura e incubare.

Utilizzando un microscopio a fluorescenza, eseguire l'imaging a intervalli regolari per osservare i neuroni oculomotori marcati in fluorescenza che estendono gli assoni per raggiungere gli occhi.

Prima di iniziare la procedura, per prima cosa, confermare la gr