Isolamento delle cellule gangliari retiniche murine mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza

Posizionare una retina murina su un colino cellulare inumidito e macerare con un movimento circolare per separare le cellule retiniche dalla matrice extracellulare.

Trasferire il colino in una provetta di raccolta.

Aggiungere un tampone fosfato e una soluzione di siero al colino per lavare e raccogliere le cellule.

Centrifuga per la sedimentazione delle cellule. Scartare il surnatante e risospendere le cellule in un tampone fosfato e in una soluzione di siero.

Aggiungere anticorpi bloccanti che si legano ai recettori Fc sulle cellule, impedendo il legame non specifico degli anticorpi bersaglio.

Successivamente, aggiungere anticorpi primari marcati in fluorescenza e non marcati che si legano a specifici marcatori di superficie cellulare su vari tipi di cellule.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Aggiungere un anticorpo secondario marcato in fluorescenza per legarsi all'anticorpo primario non marcato.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Eseguire la selezione cellulare attivata dalla fluorescenza, o FACS, per catturare i segnali fluorescenti distinti delle cellule marcate e ordinare le cellule gangliari retiniche da varie popolazioni di cellule retiniche.

Posizi