Differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo in cellule endoteliali microvascolari cerebrali

Iniziare con una piastra multipozzetto contenente cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo, o iPSC, in un terreno con un inibitore della Rho-chinasi, che promuove la sopravvivenza cellulare.

Sostituisci il terreno con un terreno essenziale contenente nutrienti e fattori di crescita.

Incubare per consentire la proliferazione e la differenziazione delle iPSC in cellule precursori.

Sostituire questo terreno con un terreno di differenziazione integrato con fattori di crescita dei fibroblasti e acido retinoico, quindi incubare.

I fattori di crescita facilitano la differenziazione delle cellule precursori in cellule endoteliali microvascolari, mentre l'acido retinoico promuove la sintesi delle proteine della giunzione stretta.

Lavare e trattare le cellule con una soluzione di enzima-EDTA per staccare le cellule, creando una sospensione a cellula singola.

Centrifugare per raccogliere le cellule e rimuovere il surnatante. Quindi, risospendere le cellule in un mezzo di differenziazione fresco.

Seminare questa sospensione cellulare in una piastra multipozzetto rivestita con collagene e proteine di adesione.

Incubare per consentire l'adesione cellulare, formando giunzioni strette tra