Isolamento e coltura di neuroni embrionali di pollo su un array multi-elettrodo

Prendi un uovo di gallina fecondato contenente un embrione in fase iniziale.

Sterilizzare il guscio e aprirlo con cura.

Rimuovere l'embrione. Sezionare e trasferire la testa su una piastra di coltura contenente un tampone. Rimuovi il bulbo oculare.

Praticare un'incisione e rimuovere gli strati cutanei, esponendo il proencefalo e il mesencefalo.

Rimuovere lo strato membranoso interno e i vasi sanguigni. Sezionare e trasferire il proencefalo su una piastra di coltura con un tampone.

Tagliare il tessuto in frammenti più piccoli e trasferirli in un tubo conico. Una volta che i frammenti si sono depositati, rimuovere il tampone.

Aggiungere una soluzione di enzima proteolitico. Incubare per digerire la matrice extracellulare del tessuto e allentare i neuroni.

Rimuovere i terreni ricchi di enzimi, lavare con terreni neurobasali, rimuovendo eventuali enzimi rimanenti.

Aggiungere terreni neurobasali. Dissociare meccanicamente il tessuto per ottenere una sospensione neuronale.

Semina questi neuroni su un sistema di array multi-elettrodo rivestito con una matrice extracellulare. Aggiungere terreni neurobasali e incubare.

I neuroni si attaccano ed estendono le proiezioni, formando una rete neu