Isolamento e coltura di cellule da telencefali dorsolaterali embrionali di topo

Prendi un embrione di topo in un tampone e separa il cranio per isolare il cervello.

Rimuovere le meningi, lo strato membranoso che copre il cervello.

Sezionare il cervello per separare gli emisferi.

Isolare i telencefali dorsolaterali dagli emisferi e trasferirli in un tubo.

I telencefali dorsolaterali sono ricchi di neuroni e cellule progenitrici neurali.

Centrifugare e rimuovere il surnatante.

Aggiungere una soluzione enzimatica. Gli enzimi scompongono la matrice tissutale, allentando le cellule.

Introdurre un mezzo di proliferazione contenente siero. Le proteine del siero inibiscono l'attività enzimatica.

Utilizzare una pipetta per dissociare meccanicamente il tessuto, formando una sospensione cellulare.

Centrifugare e rimuovere il surnatante contenente enzimi inattivati e detriti tissutali.

Risospendere le cellule nel mezzo di proliferazione.

Trasferire le cellule su una micropiastra rivestita di substrato di coltura cellulare.

Incubare per far aderire le cellule al substrato. Il terreno facilita la proliferazione delle cellule progenitrici.

Iniziare rimuovendo i cervelli da 5 a 10 embrioni E14 in una capsula di Petri con mezzo di dissezione freddo. Usa il forcipe per estrarre