Preparazione di fette di corteccia rinale-ippocampo da un cervello di cucciolo di ratto

0 visualizzazioni3:18 min • July 8th, 2025

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Prendi un cervello di cucciolo di ratto appena raccolto, con la parte dorsale rivolta verso l'alto, in una piastra di coltura con tampone refrigerato.

Apri gli emisferi cerebrali e rimuovi i tessuti che ricoprono l'ippocampo.

Incidere gli emisferi in modo che contengano l'ippocampo e la corteccia rinale.

Posizionare entrambe le semisfere con l'ippocampo rivolto verso l'alto e parallelo su una carta da filtro.

Trasferire questo gruppo in un tritatutto con la lama perpendicolare agli emisferi.

Tagliare gli emisferi allo spessore richiesto per ottenere le fette e trasferirle su una piastra di coltura con tampone refrigerato.

Separare attentamente le fette e sezionarle per includere le regioni strutturalmente intatte della corteccia ippocampale e rinale.

Trasferire le fette in inserti membranosi in una piastra a più pozzetti contenente il terreno.

Rimuovere il tampone in eccesso dalle fette e incubarle per il recupero dei tessuti.

Aggiorna il file multimediale. Le fette possono essere utilizzate per ulteriori analisi.

Trasferisci il cervello, con il lato dorsale rivolto verso l'alto, in una piastra da 60 millimetri contenente 5 millilitri di GBSS freddo. Inserire una pinza sottile nel cervelletto e inserire la spatola lungo la linea mediana per aprire con cautela l'emisfero. Usa una pinza corta e curva per rimuovere con cura il tessuto in eccesso che copre l'ippocampo senza toccare la struttura dell'ippocampo. Quindi, taglia sotto ogni ippocampo.

Trasferisci una semisfera alla volta, con l'ippocampo rivolto verso l'alto e parallelo tra loro, su un pezzo di carta da filtro. Posizionare la carta da filtro su un tritatutto con gli emisferi perpendicolari alla lama e tagliare gli emisferi a fette da 350 micron. Trasferire il tessuto affettato in una nuova capsula di Petri contenente 5 millilitri di GBSS freddo e utilizzare elettrodi a punta tonda per separare accuratamente le fette.

Conservando solo i campioni con una corteccia renale e un ippocampo strutturalmente intatti, utilizzare una spatola e un elettrodo a punta tonda per posizionare fino a quattro fette intatte su singoli inserti nel numero appropriato di pozzetti di una piastra a sei pozzetti contenente 1,1 millilitri di terreno di coltura per pozzetto.

Utilizzare una pipetta P20 per rimuovere il mezzo di dissezione in eccesso da ciascuna fetta. Posizionare la piastra nell'incubatore per colture cellulari. Cambia il mezzo ogni due o tre giorni. Usa una pinza per sollevare l'inserto. Aspirare il fluido dal pozzetto corrispondente e riposizionare l'inserto. Utilizzare una pipetta P1000 per aggiungere 1 millilitro di terreno fresco a 37 gradi Celsius in ciascun pozzetto.

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Ultimo aggiornamento: 1 agosto 2026