JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:37 min. • July 8th, 2025
Prendi un ganglio della radice dorsale o DRG, un gruppo di neuroni sensoriali, in un mezzo freddo contenente siero per proteggere i neuroni durante la successiva elaborazione.
Centrifugare, quindi rimuovere il surnatante.
Aggiungere un tampone fosfato contenente enzimi digestivi e incubare con una leggera agitazione.
Gli enzimi dissociano la matrice extracellulare, o ECM, e il tessuto DRG, allentando le cellule.
Aggiungere un terreno contenente siero per inattivare gli enzimi.
Centrifugare, quindi scartare il surnatante.
Risospendere il DRG e dissociare meccanicamente il tessuto utilizzando pipette di dimensioni progressivamente più piccole per ottenere una sospensione cellulare.
Sovrapporre le cellule su un gradiente di densità di albumina sierica bovina.
centrifuga. I neuroni si depositano sul fondo, formando una pallina.
Scartare gli strati contenenti detriti di tessuto.
Risospendere i neuroni in un terreno di coltura.
Aggiungere i neuroni a un piatto di coltura rivestito di ECM e incubare.
Rimuovi il terreno e aggiungi cellule natural killer o NK.
Aggiungi un terreno alla co-coltura e studia l'interazione tra queste cellule.
Raccogli i DRG in un tubo conico da 15 millilitri rie
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