Dissezione e montaggio di espianti cerebrali larvali di moscerini della frutta

Si inizia con le larve di Drosophila, un moscerino della frutta, in una soluzione fisiologica salina all'interno di un piatto. La soluzione impedisce la disidratazione delle larve.

Sotto un microscopio da dissezione, individuare l'estremità anteriore delle larve con i ganci per la bocca.

L'estremità anteriore contiene i dischi oculari e il sistema nervoso centrale, o SNC, che comprende i lobi cerebrali e un cordone nervoso ventrale.

Tenere l'estremità posteriore della larva usando una pinza. Con un altro paio di pinze, tirare l'estremità anteriore per estrarre gli organi interni.

Rimuovere l'intestino e i muscoli attaccati per isolare il SNC attaccato ai dischi oculari.

Per montare l'espiantante cerebrale, trasferire il tessuto estratto sulla soluzione salina racchiusa all'interno di una barriera di grasso su un vetrino.

Assicurarsi che il lato dorsale dell'espiante sia rivolto verso l'alto e sigillare il tessuto con un vetrino coprioggetti. L'espiante cerebrale è pronto per l'analisi.

Per prelevare cervelli dalla Drosophila larvale, sotto un microscopio da dissezione, utilizzare un paio di pinze da dissezione a punta standard numero 5 per tenere in posizione un campione larvale, mentre si utilizza l'altra per sezionare con cura il cervello, preservando i dischi oculari, i lobi cerebrali e il cordone nervoso ventrale. Quindi, rimuovere i muscoli attaccati per ridurre al minimo qualsiasi movimento del campione durante l'imaging. Quando tutti i cervelli sono stati raccolti, utilizzare il grasso sottovuoto per disegnare una camera quadrata su un vetrino e aggiungere 20 microlitri di soluzione salina esterna alla camera.

Usa le pinze per trasferire i cervelli nella camera e regola le posizioni dei cervelli al microscopio, con i lati dorsali rivolti verso l'alto. Coprire la camera con un vetrino coprioggetti in vetro e premere delicatamente sul vetrino coprioggetti per ridurre la deriva del campione durante la procedura di imaging.