Sviluppo e mantenimento di corpi embrioidi privi di siero

Iniziare con un pozzetto contenente cellule progenitrici neurali o aggregati NPC nel terreno-1 o DM-1 differenziante.

Queste NPC sono precursori del lignaggio neurale generato da cellule staminali pluripotenti indotte umane o hiPSC utilizzando DM-1 in condizioni controllate.

Trasferire gli aggregati NPC su un inserto a membrana posto all'interno di un pozzetto contenente DM-1 e rimuovere il terreno in eccesso.

Cambiare il terreno in DM-2 e incubare.

DM-2 fornisce nutrienti e fattori di differenziazione che promuovono la maturazione delle NPC in diversi tipi di cellule neurali.

Gli NPC indifferenziati si trasformano in corpi embrioidi, noti come corpi embrioidi privi di siero o SFEB, poiché il terreno manca di siero. Questi EB assomigliano alla morfologia di un cervello in via di sviluppo.

Trasferire l'inserto in un pozzetto contenente DM-3.

DM-3 contiene fattori di crescita essenziali per il mantenimento e la crescita degli SFEB.

Incubare fino a quando gli SFEB raggiungono la dimensione desiderata.

Dopo due settimane di coltura delle cellule, preparare piastre a sei pozzetti con inserti per colture cellulari da 40 micron e 1 millilitro di terreno DM1. Incubare queste piastre per al