Differenziazione di cellule staminali pluripotenti indotte umane ingegnerizzate in motoneuroni funzionali
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:29 min. • July 8th, 2025
Prendiamo le colonie di cellule staminali pluripotenti indotte umane, o iPSC, coltivate su una piastra rivestita di matrice extracellulare.
Le iPSC sono geneticamente modificate per esprimere fattori di trascrizione che inducono la differenziazione dei motoneuroni.
Rimuovere il terreno e aggiungere enzimi per staccare le colonie.
Dissociare meccanicamente le cellule in una sospensione a cellula singola e raccoglierle.
Centrifugare e rimuovere il surnatante.
Risospendere le cellule in terreni contenenti un inibitore che previene l'apoptosi cellulare.
Piastra le celle su un piatto rivestito di matrice.
Aggiungere nuovi terreni di differenziazione contenenti l'antibiotico doxiciclina e inibitori di piccole molecole.
La doxiciclina induce l'espressione del fattore di trascrizione, mentre gli inibitori bloccano specifiche vie di segnalazione, promuovendo la differenziazione delle iPSC nei progenitori dei motoneuroni.
Aggiungi enzimi per staccare le cellule.
Raccogli le cellule e dissociale meccanicamente.
Centrifugare ed eliminare il surnatante. Risospendere le cellule in mezzi neuronali.
Piastra le cellule su microvetrini rivestiti di proteine di adesione per promuovere l'aderenza cell
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