Generazione di un modello 3D di co-coltura di fibroblasti e neuroni corneali umani

Prendiamo i fibroblasti corneali umani.

Trasferirli in un inserto a membrana all'interno di una piastra a più pozzetti contenente il terreno.

Aggiungere il terreno all'inserto della membrana. Incubare per l'aderenza dei fibroblasti all'inserto.

Quindi, sostituire il terreno con un terreno contenente vitamina C nell'inserto della membrana e nel serbatoio.

incubare. La vitamina C stimola i fibroblasti a secernere e assemblare una matrice extracellulare 3D.

Aggiungere una sospensione di cellule di neuroblastoma umano sui fibroblasti.

Incubare, consentendo l'adesione delle cellule del neuroblastoma.

Ora, aggiungi terreni contenenti acido retinoico sulle cellule e integra il serbatoio con terreni freschi.

incubare. L'acido retinoico innesca la differenziazione delle cellule del neuroblastoma in cellule progenitrici neurali.

Quindi, rimuovi il supporto. Introdurre nuovi terreni nel serbatoio. Aggiungere terreni contenenti un fattore neurotrofico all'inserto della membrana e incubare.

I fattori neurotrofici innescano la differenziazione delle cellule progenitrici nei neuroni, generando un modello di co-coltura 3D di fibroblasti e neuroni corneali umani.

Per assemblare costrutti 3D, in pri