Immunocolorazione tissutale per citometria di massa per imaging
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:33 min. • January 15th, 2026
Posizionare un vetrino con un campione di tessuto fissato in un tampone di recupero dell'antigene e riscaldarlo.
La temperatura elevata e il pH alcalino del tampone rompono i legami incrociati delle proteine indotte dalla fissazione, esponendo gli epitopi dell'antigene.
Raffreddare il vetrino per evitare danni ai tessuti indotti dal calore, quindi risciacquare per rimuovere il tampone in eccesso.
Applicare una barriera idrofobica e posizionare il vetrino in una camera di umidità.
Aggiungere un tampone che blocca la permeabilizzazione. Il detergente del tampone permeabilizza le membrane cellulari e le proteine bloccanti mascherano i siti di legame non specifici per ridurre la colorazione di fondo.
Rimuovere il tampone in eccesso, aggiungere un cocktail di anticorpi coniugati con metallo e incubare per consentire il legame degli anticorpi ad antigeni specifici.
Lavare il vetrino, rimuovendo gli anticorpi non legati.
Aggiungi una colorazione nucleare coniugata con metallo che entra nelle cellule e si lega al DNA.
Risciacquare la macchia in eccesso e asciugare il vetrino.
Utilizzando uno scanner ottico, è possibile ottenere immagini ad alta risoluzione delle caratteristiche strutturali
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