JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:05 min • July 8th, 2025
Iniziare con una co-coltura neurone-astrocita in un array di micro-elettrodi multi-pozzetto o MEA.
Ogni pozzetto contiene una rete di neuroni derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane, o hiPSC. Gli astrociti di ratto forniscono supporto per il mantenimento della rete.
La base dei pozzetti contiene una griglia di minuscoli elettrodi.
Posizionare il MEA in un dispositivo di registrazione per catturare l'attività elettrofisiologica spontanea della rete neuronale.
Far fluire una miscela di gas umidificato nella coltura per prevenire l'evaporazione del terreno e stabilizzare il pH, garantendo la vitalità cellulare.
I neuroni trasmettono segnali tramite impulsi elettrici, noti come potenziali d'azione, che viaggiano lungo i loro assoni.
Una volta raggiunta la sinapsi, l'impulso innesca il rilascio di neurotrasmettitori, che propagano il segnale al neurone successivo.
Gli elettrodi all'interno di ciascun pozzetto registrano simultaneamente i potenziali d'azione generati da più neuroni connessi sinapticamente.
L'attività elettrofisiologica spontanea della rete neuronale conferma la differenziazione delle hiPSC in neuroni.
Acquisisci i dati a 1.200 volte l'amplificazione e campiona il segnale a 10 kilohertz utilizzando la scheda di acquisizione dati MCS. Registrare 20 minuti di attività elettrofisiologica di neuroni derivati da hiPSC coltivati su MEA. Durante la registrazione, mantenere la temperatura a 37 gradi Celsius e prevenire l'evaporazione del fluido e le variazioni di pH erogando un flusso lento e costante di gas umidificato sui MEA. Successivamente, analizza i dati utilizzando un pacchetto software personalizzato.