JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:40 min. • July 8th, 2025
Inizia con una coltura di neuroni gangliari a spirale su un array multielettrodo, o MEA.
Il MEA è costituito da elettrodi di registrazione collegati ai contatti tramite un circuito.
Lavare il MEA per rimuovere il supporto e asciugare i contatti per evitare rumori indotti dall'umidità durante la registrazione.
Montare il MEA sul suo supporto e installarlo nella configurazione di registrazione.
I contatti MEA si allineano con i connettori del supporto che trasmettono i segnali elettrici alla configurazione di registrazione.
Aggiungere una soluzione che imita l'ambiente extracellulare, consentendo la normale attività fisiologica nei neuroni.
Inizia la registrazione. Gli elettrodi rilevano segnali spontanei o potenziali d'azione generati dai neuroni, visualizzati come picchi sull'interfaccia del software.
Ora, applica un impulso elettrico a un elettrodo che mostra attività spontanea.
L'impulso genera un campo elettrico, stimolando i neuroni sugli elettrodi vicini.
Registrare l'attività dipendente dalla stimolazione.
Infine, aggiungi una neurotossina che blocca i canali ionici voltaggio-dipendenti, prevenendo la generazione di potenziale d'azione.
Registra il segnale per identificare il rumore di fondo.
Dopo un totale di 18 giorni di coltura, lavare la coltura MEA con la soluzione extracellulare preparata in precedenza a temperatura ambiente. Quindi, asciugare i contatti del chip MEA con un pezzo di tessuto e montare i MEA sul supporto MEA. Infine, installa il MEA sulla configurazione di registrazione.
Successivamente, aggiungere 300 microlitri di soluzione extracellulare e attendere 10 minuti per consentire al sistema di stabilizzarsi prima di registrare. Ora, registra l'attività spontanea per due minuti da tutti gli elettrodi e identifica gli elettrodi attivi. Quindi, identificare gli elettrodi che rispondono alla stimolazione.
Per escludere l'artefatto di stimolazione, stimolare dallo stesso elettrodo 10 volte. Se la coltura risponde almeno otto volte su 10, si può presumere che sia una risposta positiva dopo la stimolazione indotta da elettrodi. Per identificare il rumore di fondo, applicare TTX alla coltura a una concentrazione di un micromolare per bloccare i canali del sodio voltaggio-dipendenti, quindi registrare per due minuti.