Stimolazione transspinale a corrente continua del motoneurone spinale di un ratto

Inizia posizionando una spugna imbevuta di soluzione salina sulla vertebra toracica-12 di un ratto preparato per la procedura.

Posizionare un elettrodo su di esso per la stimolazione transspinale a corrente continua o tsDCS, che comporta l'applicazione di una corrente continua attraverso il midollo spinale.

Per misurare la registrazione intracellulare di un motoneurone bersaglio durante la tsDCS, inserire un microelettrodo nel midollo spinale nella posizione della sua origine.

Valutare il potenziale di membrana di base del motoneurone e la frequenza degli impulsi elettrici per garantire che il microelettrodo sia posizionato in modo sicuro per misurazioni accurate durante la tsDCS.

Applicare la tsDCS anodica, in cui gli ioni caricati positivamente entrano nel neurone mentre la corrente scorre dall'anodo attraverso il tessuto fino al catodo.

Applicare la tsDCS catodica, dove gli ioni caricati negativamente entrano nel neurone mentre la corrente scorre nella direzione inversa.

Registrare i cambiamenti nelle proprietà elettriche del motoneurone durante la tsDCS anodica e catodica.

Per posizionare gli elettrodi di stimolazione transspinale a corrente continua, posizionare una spugna imbevuta di soluzione salina sul lato dorsale della vertebra TH-12 e utilizzare una manipolazione fine per premere la spugna con un elettrodo attivo di stimolazione transspinale a corrente continua. Quindi, montare un microelettrodo personalizzato sul micromanipolatore, consentendo un movimento a passi da 1 a 2 micron e una calibrazione stereotassica, e inserire una punta per micropipetta in un patch selezionato nel PR con un angolo mediale-laterale di 15-20 gradi.

Per registrare la membrana del motoneurone e le proprietà di attivazione, nella modalità ponte dell'amplificatore intracellulare, stimolare i rispettivi rami nervosi a identificare il motoneurone sulla base dell'aspetto tutto o niente del potenziale d'azione antidromico.

Nella modalità di blocco di corrente discontinua dell'amplificatore intracellulare con una modalità di commutazione di corrente da 4 a 8 kilohertz, utilizzare impulsi di corrente depolarizzante intracellulare di 0,5 millisecondi per evocare un potenziale d'azione ortodromico in un motoneurone.

Per calcolare la resistenza di input della cellula, stimolare un motoneurone con 40 brevi impulsi di 100 millisecondi di corrente iperpolarizzante da 1 nanoampere. Per determinare il valore della reobase come l'ampiezza minima della corrente depolarizzante necessaria per suscitare un singolo picco, stimolare un motoneurone con impulsi d'onda quadra di 50 millisecondi ad ampiezze crescenti.

Quindi, iniettare impulsi a onda quadra da 500 millisecondi di corrente depolarizzante ad ampiezze crescenti in incrementi di 0,122 nanoampere per evocare scariche ritmiche dei motoneuroni. Per la stimolazione transspinale a corrente continua, avviare le procedure di polarizzazione mediante l'applicazione transspinale di corrente continua, mantenendo una penetrazione stabile del motoneurone.