Microiniezione di farmaci con registrazione elettrofisiologica in un cervello di ratto

Inizia con un iniettore, un sistema di iniezione contenente elettrodi. Questo è dotato di un microago e di un elettrodo a filo d'argento inseriti all'interno di una micropipetta di vetro.

Riempire l'iniettore con una soluzione farmacologica contenente un colorante per facilitare il monitoraggio della diffusione del farmaco all'interno del cervello.

Collegare una siringa piena di olio minerale all'iniettore. Asciugare il liquido in eccesso.

Fissare questo iniettore su un'unità stereotassica e collegarlo a un sistema di micropompe.

Posizionare l'iniettore sulla regione cerebrale bersaglio di un ratto anestetizzato con un foro chirurgico nel cranio.

Abbassare gradualmente l'iniettore per penetrare nella regione bersaglio.

Interrompere l'inserimento alla ricezione di specifici segnali elettrici che confermano il posizionamento ottimale dell'iniettore.

Copri il cranio esposto con agar caldo per evitare che i tessuti si secchino.

Lascia che il tessuto cerebrale si stabilizzi.

Iniettare il dosaggio desiderato del farmaco.

Registrare i segnali elettrici per monitorare l'attività neuronale in risposta al farmaco somministrato.

Preparare l'iniezione riempiendo prima una siringa da 5 a 10 microlitri con olio minerale. Successivamente, preparare il farmaco di interesse con un colorante in soluzione fisiologica. Qui, lo 0,5% di Chicago Sky Blue viene mescolato con 300 micromolari di GABA. Ora, riempire la pipetta per iniezione caricando prima una siringa da 1 millilitro con la soluzione preparata, quindi utilizzando la siringa per caricare la pipetta.

Quando si rimuove la siringa, mantenere una leggera pressione sullo stantuffo in modo che il vuoto non rimuova la soluzione dall'iniettore. Verificare la fuoriuscita di liquido in eventuali punti di perdita. Tamponare il liquido in eccesso e ricontrollare la presenza di perdite. Collegare ora la micro-siringa con olio minerale all'iniettore. Quindi, rimuovere la soluzione in eccesso con una garza.

Controllare la punta di iniezione. Dovrebbe essere possibile far scorrere piccole gocce di soluzione attraverso di esso. In caso contrario, è bloccato o perde. Ora, montare saldamente l'iniettore su un sistema di micropompa. Quindi, spostare la posizione dell'iniettorio alle coordinate target e abbassare l'elettrodo al collicolo superiore, che può essere identificato attraverso la registrazione dei potenziali evocati visivi.

Mentre l'elettrodo è abbassato, applicare una piccola pressione positiva applicando una bassa velocità di iniezione per evitare l'intasamento. Interrompere l'iniezione quando la struttura è raggiunta. Dopo aver inserito l'iniettore, coprire la corteccia esposta con agar caldo per evitare l'essiccazione. Dopo il posizionamento finale dell'elettrodo, attendere 30 minuti per consentire la stabilizzazione del tessuto che circonda l'elettrodo. Quindi, iniettare da 400 a 800 nanolitri di soluzione a una velocità di 40 nanolitri al minuto fino all'inattivazione dell'attività neuronale nel collicolo superiore.

L'elettrodo dovrebbe mostrare una riduzione dei picchi durante l'iniezione della soluzione inibitoria.