Definizione di un patch clamp a cellula intera per la registrazione elettrofisiologica da una retina di topo a montaggio piatto

Posizionare una retina di topo a montaggio piatto in una soluzione fisiologica all'interno di una camera di registrazione.

Utilizzando un microscopio, posizionare una pipetta di registrazione sopra la retina. La pipetta contiene un elettrodo ed è riempita con una soluzione interna.

Applicare una pressione positiva per evitare l'intasamento della pipetta, inserirla nella retina e quindi ridurre la pressione per evitare danni ai tessuti.

Far avanzare la pipetta verso le cellule amacrine starburst, o SAC, che sono sinapticamente legate ad altri neuroni.

Avvicinati a una cellula fino a quando non si forma una fossetta sulla sua membrana. Rilasciare la pressione, permettendo alla membrana di aderire alla punta.

Utilizzare una corrente negativa per aspirare un cerotto a membrana nella pipetta.

Applicare l'aspirazione per rompere la membrana, stabilendo la continuità tra l'elettrodo e il citoplasma cellulare, una tecnica chiamata patch-clamp a cellula intera.

Per registrare le correnti sinaptiche, applicare una tensione per mantenere costante il potenziale di membrana del SAC.

I neurotrasmettitori rilasciati dai neuroni sinapticamente collegati innescano il flusso di ioni attraverso i rec