JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:25 min • July 8th, 2025
Prendi una camera di registrazione contenente l'array di microelettrodi penetranti o PMEA, che registra i segnali elettrici dal tessuto neurale.
Collegare l'ingresso ai flaconi contenenti aCSF ossigenato e aCSF ossigenato con 4-aminopiridina o 4-AP utilizzando un connettore trivalve.
Collegare l'uscita a un tubo a vuoto.
Riscaldare la tubazione tra l'ingresso e il trivalve alla temperatura fisiologica.
Con l'ingresso e l'uscita chiusi, trasferire l'ippocampo aperto nella camera.
Al microscopio, posizionare l'ippocampo sul PMEA.
Rimuovere la soluzione dalla camera.
Posizionare un ancoraggio per tessuti per trattenere il tessuto sugli elettrodi PMEA.
Aprire l'ingresso e l'uscita per avviare il flusso aCSF.
Incubare il tessuto con aCSF per consentire l'acclimatazione neuronale.
Quindi, fluire in aCSF con 4-AP. Il 4-AP blocca i canali neuronali del potassio, prolungando la durata del potenziale d'azione.
La PMEA cattura i segnali elettrici proporzionali all'attivazione neurale potenziata dai neuroni dell'ippocampo.
In questa procedura, riempire un flacone con aCSF normale e un altro flacone con 4-AP aCSF. Bollare le soluzioni con il 95% di ossigeno e il 5% di anidride carbonica dall'inizio degli esperimenti. Utilizzare un connettore trivalve per controllare quale soluzione verrà selezionata durante un esperimento.
Quindi, collegare un tubo a vuoto all'uscita della camera per rimuovere la soluzione in un contenitore per la polvere. Riscaldare la tubazione prima di erogare la soluzione nella camera di registrazione e mantenerla a una temperatura controllata di 35 gradi Celsius. Dopo aver chiuso l'ingresso e l'uscita della camera di registrazione, utilizzare un contagocce per pipette in vetro su misura per trasferire l'ippocampo aperto nella camera di registrazione.
Al microscopio, posizionare l'ippocampo aperto con il lato evidente rivolto verso il basso, l'area CA3 rivolta verso l'esterno e il campo CA1 rivolto verso il ricercatore. Aspirare con cautela la soluzione nella camera utilizzando una pipetta a vuoto dal bordo della camera di registrazione fino a quando la camera non si è asciugata e il tessuto si trova sull'array.
Quindi, posizionare con cura un'ancora di tessuto su misura sopra il tessuto per tenere l'ippocampo aperto sull'array. Riempire nuovamente la camera di registrazione con alcune gocce di soluzione. Aprire gradualmente l'ingresso e l'uscita per regolare la portata a circa due gocce al secondo nella camera di gocciolamento IV.
Incubare il tessuto nella camera di registrazione con aCSF normale per circa un minuto. Quindi, passare l'alimentazione della soluzione all'aCSF disciolto 4-AP e regolare correttamente la portata. Incubare il tessuto in 4-AP disciolto in aCSF per circa 5-10 minuti prima della registrazione.