Preparazione di un modello di ratto per valutare l'integrità del percorso visivo utilizzando una configurazione di elettrofisiologia

La luce stimola i fotorecettori dell'occhio, inviando segnali elettrici alla corteccia visiva del cervello per elaborare le informazioni visive.

Per misurare l'integrità di questo percorso visivo, inizia con un ratto anestetizzato e adattato al buio in una stanza buia.

Posizionare un elettrodo VEP di riferimento attorno ai denti anteriori inferiori del ratto.

Fissare il ratto con una striscia di fissaggio su una piattaforma ERG davanti a una ciotola di Ganzfeld, un dispositivo di illuminazione della luce all'interno di una gabbia di Faraday.

Posizionare gli elettrodi ERG di riferimento attorno all'equatore dell'occhio, circondando l'anello sclerale, e fissarli.

Quindi, collegare gli elettrodi attivi VEP alle viti del cranio pre-impiantate per rilevare i segnali corticali.

Posizionare gli elettrodi ERG con lubrificante al centro degli occhi per misurare le loro risposte agli stimoli luminosi.

Rimuovere il lubrificante in eccesso e inserire un elettrodo di terra nella coda per ridurre il rumore elettrico.

Avvicinare la piattaforma ERG alla vasca di Ganzfeld e chiudere la gabbia di Faraday per ridurre al minimo le interferenze esterne.

Per le registrazioni scotopiche, tutte le procedure vengono eseguite in una camera oscura. A scopo illustrativo, il posizionamento degli elettrodi viene eseguito in condizioni di normale illuminazione della stanza. L'animale è stato adattato al buio per 12 ore e anestetizzato con ketamina e xilazina.

Dopo la dilatazione della pupilla e l'anestesia topica, agganciare l'elettrodo EP inattivo attorno agli incisivi inferiori. Quindi, posiziona l'animale sulla piattaforma ERG di fronte alla ciotola di ganzfeld situata nella gabbia di Faraday. Fissare l'animale alla piattaforma con una striscia di chiusura a strappo, posizionata saldamente ma non strettamente intorno alla nuca.

Successivamente, posizionare gli elettrodi ERG-inattivi circondando l'anello sclerale in modo non invasivo attorno all'equatore dell'occhio, circa tre millimetri dietro il limbus. Stabilizzare questo aspetto fissando gli elettrodi alla striscia di fissaggio a strappo intorno alla nuca. Ripetere la procedura per l'occhio controlaterale.

A questo punto, fissare gli elettrodi attivi VEP fissando le clip a coccodrillo alle viti in acciaio inossidabile preimpiantate sul cranio. Prima del posizionamento dell'elettrodo ERG-attivo, posizionare una piccola goccia di carbossimetilcellulosa sodica all'1% sull'elettrodo per migliorare la qualità del segnale. Posizionare gli elettrodi ERG-attivi in modo che tocchino leggermente la superficie corneale centrale utilizzando un micromanipolatore collegato al braccio stereotassico personalizzato.

Assicurarsi che la carbossimetilcellulosa sodica entri in contatto solo con la cornea e non con la sclera, rimuovendo il liquido in eccesso. Quindi, inserire da 2 a 5 millimetri dell'elettrodo dell'ago di messa a terra in acciaio inossidabile per via sottocutanea nella coda. Fai scorrere la piattaforma più vicino alla ciotola di Gazfeld e assicurati che gli occhi dell'animale siano allineati con l'apertura della ciotola per consentire un'illuminazione uniforme di entrambe le retine.

Successivamente, chiudere la gabbia di Faraday per ridurre il rumore estraneo.