Impianto di elettrodi in una corteccia murina per registrazioni elettrocorticografiche

Prendete un topo anestetizzato con il cranio esposto su una struttura stereotassica. A questo topo è stato iniettato un virus che esprime la proteina mutata che recide l'actina nella corteccia cerebrale destra.

Avvitare un elettrodo elettrocorticografico nel sito di iniezione.

Contrassegnare e forare il cranio perpendicolarmente per l'elettrodo posteriore, l'elettrodo di riferimento e le viti di manutenzione.

Disinfettare i siti con antisettico e bloccarli per prevenire il sanguinamento.

Inserire le viti e gli elettrodi con gli stessi angoli di foratura e applicare il cemento dentale nello spazio tra di loro.

Ora, usa la luce per solidificare il cemento.

Coprire le basi degli elettrodi e delle viti con cemento dentale e applicare nuovamente la luce. Fissare il gruppo con cemento acrilico. Sutura la pelle.

Collegare i fili d'oro degli elettrodi ai pin del connettore.

Coprire lo spazio del connettore con cemento acrilico.

Consenti al mouse di riprendersi. Dopo il recupero, registrare i segnali della corteccia cerebrale in risposta all'iniezione virale.

Per l'impianto dell'elettrodo, utilizzare una pinza Kelly diritta per avvitare lentamente un elettrodo elettrocorticografico con un filo d'oro dritto, nell'asse verticale del foro in cui è stato iniettato l'AAV, lasciando almeno 2,5 millimetri di vite all'esterno del cranio per ridurre al minimo il danno alla dura madre e alla corteccia cerebrale.

Utilizzare una penna per segnare la posizione dell'elettrodo di riferimento a 2,6 millimetri lateralmente a destra rispetto alla linea mediana e 0,7 millimetri posteriormente alla linea mediana, e la posizione dell'elettrodo elettrocorticografico posteriore a 1,5 millimetri lateralmente a destra rispetto alla linea mediana e 1,5 millimetri anteriormente alla lambda, e le posizioni di tre viti di manutenzione sull'emisfero sinistro senza coordinate specifiche, ma il più distanti possibile tra loro e dagli elettrodi elettrocorticografici.

Utilizzare il trapano per perforare con cura il cranio perpendicolarmente alla superficie del cranio nelle posizioni contrassegnate dagli altri elettrodi e viti e lavare il cranio perforato con una soluzione di iodio povidone al 10%.

Ostruire i fori con piccoli pezzi arrotolati di salvietta delicata prima di installare le viti per evitare sanguinamento e contaminazione e utilizzare una pinza Kelly diritta per inserire le viti nei fori con la stessa angolazione con cui sono stati praticati i fori. Metti alcune piccole gocce di cemento dentale al centro dello spazio ad anello all'interno delle viti. Dopo aver coperto gli occhi dell'animale, applicare la luce per tre-cinque minuti per solidificare il cemento e utilizzare ulteriore cemento dentale per coprire la base degli elettrodi elettrocorticografici e le viti di ancoraggio per formare un contorno a forma di corona.

Dopo aver applicato altri tre o cinque minuti di luce, riempire il centro del montaggio con cemento acrilico e rimuovere i morsetti chirurgici.

Utilizzare una sutura sintetica monofilamento assorbibile per chiudere la pelle nella parte anteriore e posteriore del montaggio in modo che il cranio non sia esposto e utilizzare una pinza curva per tenere il connettore sopra il montaggio per allineare accuratamente i fili d'oro degli elettrodi con i pin del connettore. Quindi, saldare rapidamente ciascuna estremità dell'elettrodo a un singolo pin del connettore corrispondente.

Dopo aver rimosso il mouse dal telaio, coprire lo spazio vuoto tra il connettore e la testa con il cemento acrilico e, dopo la pesatura, posizionare il mouse in una gabbia pulita con un coperchio non a maglie su un cuscinetto termico.