Un approccio non invasivo per studiare l'elettrofisiologia dei motoneuroni negli embrioni di zebrafish

Metti embrioni di pesce zebra geneticamente modificati sotto uno stereomicroscopio e osserva l'avvolgimento spontaneo della coda innescato dai motoneuroni del midollo spinale.

Le proprietà intrinseche di questi neuroni causano l'afflusso di ioni attraverso i canali del sodio, portando alla depolarizzazione spontanea della membrana e alla generazione di potenziali d'azione che si propagano ai muscoli, innescando l'avvolgimento della coda. Misurare la frequenza di avvolgimento.

Trasferire alcuni embrioni in un bloccante dei canali del sodio per inibire l'afflusso di sodio e valutare la ridotta frequenza di avvolgimento.

Monta gli embrioni non trattati in agarosio fuso; lascia solidificare l'agarosio per limitare il movimento e osserva al microscopio a fluorescenza.

I motoneuroni esprimono un biosensore con un dominio di rilevamento della tensione legato alla membrana, o VSD, fuso con fluorofori donatori e accettori.

La depolarizzazione modifica la conformazione del VSD, avvicinando i fluorofori.

Dopo l'eccitazione, il donatore trasferisce energia all'accettore, provocando l'emissione di fluorescenza dell'accettore.

Aggiungere il bloccante per inibire la depolarizzazione, che riduce l