Registrazioni elettrofisiologiche in vivo di attività cerebrali da più siti nei ratti

Cominciamo con un ratto anestetizzato fissato in una cornice stereotassica con il cranio esposto.

Usa i punti di riferimento sul cranio per calibrare e segnare le coordinate desiderate.

Praticare dei fori nelle posizioni contrassegnate.

Rimuovi i detriti e taglia lo strato esterno del cervello.

Sciacquare frequentemente i fori con soluzione fisiologica per evitare che si secchino.

Praticare fori aggiuntivi e viti di ancoraggio per sostenere gli elettrodi.

Installare gli elettrodi di riferimento e gli elettrodi di registrazione elettrofisiologica. Fissali applicando la resina acrilica.

Disporre gli elettrodi a microfilo di tungsteno su un telaio in base alle posizioni multi-target nel cervello.

Più elettrodi consentono la registrazione simultanea delle attività cerebrali da più siti target.

Utilizzando il punto di riferimento sul cranio, posizionare gli elettrodi a microfilo di tungsteno.

Inseriscili delicatamente nel cervello.

Configura il software di registrazione per rilevare l'attività cerebrale.

Abbassare gli elettrodi alla profondità target e iniziare la registrazione dei dati.

Al microscopio, utilizzare uno strumento di allineamento stereotassico standard per ratti per calibrare la punta designata per il bregma e regolare la barra incisiva fino a quando i punti designati per il bregma e il lambda sullo strumento toccano contemporaneamente il cranio. Utilizzando un supporto stereotassico con cannula, calibrarlo sulla bregma e quindi calcolare la posizione di tutti i fori sul cranio.

Quindi, segnare le posizioni dei fori da praticare graffiando accuratamente il cranio o utilizzando un pennarello chirurgico a colori. Quindi, utilizzando un microtrapano, praticare con cura tutti i fori con un diametro di circa 1 millimetro. Per STN e SNr, praticare un foro comune di circa 2 millimetri per 3 millimetri.

Prendi una cannula sottile e piega la punta per formare due ganci. Quindi, utilizzare i ganci per rimuovere eventuali detriti dai fori e tagliare e rimuovere con cura la dura madre nel foro STN/SNr comune. Successivamente, sciacquare i fori con soluzione fisiologica.

Applicare una goccia di soluzione fisiologica ogni 15 minuti sui fori per evitare che il cervello e la dura si secchino. Quindi prendi un micro-trapano e una micro vite in acciaio inossidabile abbinata. Praticare un foro e avvitare una microvite tra i fori degli elettrodi epidurali di riferimento sopra il cervelletto.

Quindi, guidare le punte degli elettrodi con una pinzetta sottile e farle scorrere direttamente sotto l'osso del cranio nei fori. Fissare tutti gli elettrodi epidurali con acrilico dentale bicomponente. Assicurarsi di non coprire il punto di bregma né di intaccare il comune foro STN/SNr.

Quindi, inserire il supporto preparato con gli elettrodi a microfilo di tungsteno nel telaio stereotassico. Calibrare l'elettrodo più ventrale al bregma, che ha lo scopo di colpire l'STN. Regolare la posizione calcolata sopra il foro STN/SNr comune e abbassare gli elettrodi fino al cervello.

Assicurati che gli elettrodi a microfilo di tungsteno entrino senza intoppi nel cervello. In questa procedura, impostare il software di registrazione, ad esempio il filtro passa-banda, e amplificare il segnale di dati grezzi. Quindi, utilizzare un filtro LFP e spike online con le impostazioni appropriate.

Per tutti i filtri, utilizzare un filtro di tipo Butterworth. Imposta una soglia di picco per l'ordinamento dei picchi online. La maggior parte dei software di registrazione consente l'impostazione di una soglia di picco, che è un valore di ampiezza al di sopra della soglia in cui un segnale viene contrassegnato come picco dal software. Quindi, abbassare lentamente gli elettrodi a microfilo di tungsteno a 1 millimetro sopra l'STN e attendere che il segnale si stabilizzi, se necessario.