Monitoraggio ottico ed elettrofisiologico simultaneo delle cellule neuronali in fette di cervello

Inizia perfondendo un liquido cerebrospinale artificiale aerato o aCSF su una griglia a maglie in una camera di perfusione.

Trasferisci una fetta di cervello contenente neuroni fluorescenti che esprimono proteine e ancorala con un dispositivo cablato al platino.

Ruotare la griglia mesh per l'allineamento.

Abbassare la sonda multicanale verso la fetta.

Regolare il cubo del filtro per la visualizzazione delle proteine fluorescenti.

Ruotare la fetta per allineare la sonda.

Regolare l'altezza della sonda sotto la superficie del tessuto.

Ora, perfondi l'aCSF e concentrati sui neuroni marcati in fluorescenza.

Utilizzando un obiettivo ad alta potenza, mettere a fuoco il tessuto e regolare la luce di eccitazione.

Utilizzare un filtro di luce appropriato per osservare la fluorescenza nei neuroni.

Regolare la lente dell'obiettivo per creare spazio per la pipetta per cerotti e applicare una pressione positiva.

Quindi, posizionare la pipetta vicino al neurone per formare una fossetta di membrana.

Infine, applicare un'aspirazione debole per creare una tenuta della membrana, seguita da una forte aspirazione per rompere la membrana e ottenere registrazioni elettriche dal neurone mirato.

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