JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
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Prendi il controllo e le larve transgeniche del moscerino della frutta Drosophila.
Le larve transgeniche esprimono un canale ionico sensibile alla luce nei neuroni del recettore olfattivo o ORN. Questi neuroni fanno parte del circuito olfattivo, che rileva gli stimoli olfattivi e trasmette segnali al cervello, guidando il movimento larvale in risposta agli stimoli.
Posizionare le larve su un piatto con agarosio solidificato all'interno di un'arena comportamentale e coprire il piatto.
Esporre le larve a una lunghezza d'onda della luce che stimola i canali ionici e registrare il comportamento di navigazione larvale.
La luce attiva l'all-trans-retinal, un cromoforo, che induce l'apertura dei canali ionici, nota come stimolazione optogenetica, e consente l'afflusso di cationi.
L'afflusso genera potenziali d'azione che trasmettono segnali lungo il circuito olfattivo, influenzando il comportamento di navigazione larvale.
Le larve transgeniche con canali ionici sensibili alla luce mostrano un cambiamento nella distanza percorsa in linea retta prima di cambiare direzione, noto come lunghezza di corsa, rispetto alle larve di controllo.
Per il test del comportamento, mantenere una temperatura e un'umidità costanti nella stanza comportamentale. Preparare il terreno strisciante larvale versando 150 millilitri di agarosio fuso all'1,5% in una capsula di Petri quadrata di 22 centimetri per 22 centimetri.
Lasciare solidificare e raffreddare l'agarosio per 1 o 2 ore nelle piastre di Petri, prima di utilizzarle nel test comportamentale. Dopo che l'agarosio si è solidificato, trasferire non più di 20 delle larve di terzo stadio preparate al centro della capsula di Petri e coprire la capsula di Petri con il coperchio.
Posizionare la capsula di Petri nell'arena del comportamento sotto la telecamera CCD. Accendi la sorgente luminosa a LED a infrarossi da 850 nanometri per visualizzare le larve nel video. Avviare la telecamera CCD per registrare il movimento larvale. Infine, passa all'elaborazione e all'analisi dei dati.