Inibizione mediata da microRNA delle correnti postsinaptiche eccitatorie nelle fette di ippocampo di topo

Prendiamo le fette di cervello dell'ippocampo di topo contenenti neuroni CA3 infettati con un vettore virale ricombinante.

Il genoma virale esprime un canale attivato dalla luce marcato con un reporter fluorescente e un microRNA che riduce l'espressione dei canali del calcio voltaggio-dipendenti.

Posizionare una fetta in una camera di registrazione in condizioni di oscurità. Utilizzando un microscopio, identificare i neuroni CA3 fluorescenti.

Applicare un elettrodo di registrazione a un neurone CA1 che riceve input dai neuroni CA3 infetti. Rompere la membrana per registrare le correnti ioniche intracellulari.

Applicare un inibitore per bloccare i recettori inibitori dei neurotrasmettitori, consentendo solo segnali eccitatori.

Utilizzando impulsi luminosi, stimola i canali attivati dalla luce nei neuroni CA3 infetti, generando potenziali d'azione.

Nei topi non infetti, il potenziale d'azione attiva i canali del calcio voltaggio-dipendenti, causando un afflusso di ioni calcio che innesca il rilascio di neurotrasmettitori. I neurotrasmettitori innescano correnti postsinaptiche eccitatorie, o EPSC, nei neuroni CA1.

Nei topi infetti, la riduzione mediata da microRNA dei canali del calci