JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:55 min. • July 8th, 2025
Fissare una fetta di cervello di topo in una camera di registrazione, perfusa con aCSF ossigenato dopo un'incubazione prolungata.
Le cellule della fetta sono caricate con un indicatore di calcio, che facilita le misurazioni intracellulari del calcio.
Prelevare una pipetta di registrazione comprendente un elettrodo in una soluzione elettrolitica.
Identificare un neurone bersaglio. Posizionare la pipetta di registrazione con una pressione positiva sulla membrana cellulare, creando una fossetta.
Applicare una pressione negativa per creare una tenuta ermetica.
Inoltre, applicare impulsi a pressione negativa, rompendo la membrana e stabilendo una configurazione dell'intera cellula.
Perfondere aCSF con un'alta concentrazione di potassio, che depolarizza la membrana del neurone.
La depolarizzazione apre i canali del sodio, innescando un potenziale d'azione, che a sua volta attiva i canali del calcio voltaggio-dipendenti e consente l'afflusso di calcio.
Gli ioni calcio si legano all'indicatore, migliorando la fluorescenza, che può essere visualizzata con un'illuminazione adeguata.
L'aumento della fluorescenza intracellulare, causato dall'afflusso di calcio in seguito all'applicazione di po
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