Tecnica automatizzata di patch clamp guidata da immagini per lo studio dei neuroni nelle fette di cervello
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:41 min. • July 8th, 2025
Inizia con una fetta di cervello immobilizzata in una camera di registrazione.
Utilizzando il software controllato dalla fotocamera di un microscopio, mettere a fuoco l'area target
Accendi la luce di eccitazione e scatta più foto a diverse profondità.
Il software rileva le coordinate delle celle marcate in fluorescenza.
A questo punto, posizionare la pipetta per cerotti riempita di soluzione contenente l'elettrodo di registrazione nella camera.
Utilizzare un software adatto per calibrare i controlli di posizione.
In condizioni di ingrandimento elevato, ricalibrare i controlli per puntare con precisione la cella marcata in fluorescenza.
Seleziona le coordinate della cella di destinazione.
Avviare l'abbassamento automatico della pipetta per cerotto.
Il computer monitora la resistenza tramite l'elettrodo. Applicare una pressione negativa, un aumento della resistenza dovuto al contatto della pipetta con la membrana cellulare indica la formazione di gigaseal.
Successivamente, il software riduce ulteriormente la pressione per perforare la membrana cellulare e ottenere una configurazione del cerotto a cellula intera.
In questo passaggio, posizionare una fetta di cervello al centro della c
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